[科普中國]-活菌計數(shù)法

釋義

活菌計數(shù)法又稱間接計數(shù)法。直接計數(shù)法測定到的是死、活細(xì)胞總數(shù)，而間接計數(shù)法測得的僅是死、活菌總數(shù)。這類方法所得的數(shù)值往往比直接計數(shù)法測得的數(shù)值小?；罹嫈?shù)法一般有平板菌落計數(shù)、液體稀擇最大或然數(shù)法（ most probable number, MPN）測數(shù)、薄膜過濾計數(shù)法。2

操作方法平板菌落計數(shù)此法是基于每一個分散的活細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)基中具有生辰繁殖并能形成一個菌落的能力。因此，菌藩數(shù)就是待測樣品所含的活菌數(shù)。將單細(xì)胞微生物待測液經(jīng)10 倍系列稀釋后，將一定濃度的稀釋液定量地接種到瓊脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，長出的菌落數(shù)就是稀釋液中含有的活細(xì)胞數(shù)，可以計算出供測樣品中的活細(xì)胞數(shù)。但應(yīng)注意，由于各種原因，平板上的單個菌落可能并不是由一個菌體細(xì)胞形成的，因此在表達(dá)單位樣品含菌數(shù)時，可用單位樣品中形成菌藩單位來表示，即CFU/ml 或CFU/g(CFU 即colony-forming unit ）。2

液體稀擇最大或然數(shù)法（ MPN）測數(shù)取定量（ 1 ml）的單細(xì)胞微生物懸液，用培養(yǎng)液作定量10 倍系列稀釋，重復(fù)3 ～5 次，將不同稀釋度的系列稀釋管置適宣溫度下培養(yǎng)。在稀釋度合適的前提下，在菌濃度相對較高的稀釋管內(nèi)均出現(xiàn)菌生長，而自某個稀釋度較高的稀釋管開始至稀釋度更高的稀釋管中均不出現(xiàn)菌生長，按稀釋度自低到高的順序，把最后3 個稀釋度相對較高的、出現(xiàn)菌生長的稀釋管之稀釋度稱為臨界級數(shù)。由3 ～5 次重復(fù)的連續(xù)三級臨界級數(shù)族得指數(shù)，查相應(yīng)重復(fù)的最大或然數(shù)表求得最大可能數(shù)，再乘以出現(xiàn)生長的臨界級數(shù)的最低稀釋度，即可測得比較可靠的樣品活菌濃度。2

薄膜過濾計數(shù)法測定水與空氣中的活菌數(shù)量時，由于含菌濃度低，則可先將待測樣品（一定體積的水或空氣）通過微孔薄膜（如硝化纖維薄膜）過濾濃縮，然后把漉膜放在適當(dāng)?shù)墓腆w培養(yǎng)基上培養(yǎng)，長出菌落后即可計數(shù)。

使用注意此法可因操作不熟練造成污染，或因培養(yǎng)基溫度過高損傷細(xì)胞等原因造成結(jié)果不穩(wěn)定。盡管如此，由于該方法能測出樣品中微量的菌數(shù)，仍是教學(xué)、科研和生產(chǎn)上常用的一種測定細(xì)菌數(shù)的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽抱與抱子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等。

其他方法除上述兩種常用的計數(shù)方法外，還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上 ( 或一定面積中 ) 的細(xì)菌數(shù)；比濁法原理是在一定范圍內(nèi)，菌的懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度 (O ． D ． ) 表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)，否則不準(zhǔn)確。微生物計數(shù)法，發(fā)展迅速，現(xiàn)有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。