[科普中國(guó)]-H7N9疫苗

H7N9型禽流感是一種新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽兩地率先發(fā)現(xiàn)，而在2017年1月再次發(fā)生H7N9型禽流感疫情。H7N9疫苗研制嘗試把H7N9的主要致病基因植入到成熟的疫苗載體上，更加有效的激發(fā)人體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。未來(lái)，H7N9禽流感疫苗將在活禽和養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員、家庭主婦等高危人群中推廣接種。

一、 簡(jiǎn)介截至2017年，已有多個(gè)H7N9疫苗備選株通過(guò)了WHO安全性評(píng)價(jià)，可用于疫苗研發(fā)。在此基礎(chǔ)上， H7N9滅活疫苗、減毒活疫苗以及重組疫苗均已取得較好的研究結(jié)果。部分藥企也先后提交疫苗臨床試驗(yàn)申請(qǐng)，H7N9疫苗的研制工作目前進(jìn)度不一。

二、難題H7N9禽流感病毒感染早期若使用常見(jiàn)抗病毒藥物進(jìn)行干預(yù)，能有效降低并發(fā)癥的發(fā)生率，減少感染者死亡。但已有研究顯示，新型H7N9禽流感病毒已對(duì)目前使用的如金剛烷胺、扎那米韋、奧司他韋、帕拉米韋等抗病毒藥物產(chǎn)生了抗性。有的 H7N9禽流感病毒甚至有對(duì)扎那米韋和奧司他韋的雙重抗性。這使得H7N9禽流感病毒感染的治療具有時(shí)限性，且變得困難。

對(duì)于外界關(guān)注度很高的H7N9流感疫苗的問(wèn)題，國(guó)家衛(wèi)計(jì)委表示，目前并沒(méi)有預(yù)防H7N9病毒感染的疫苗可用。

三、研究進(jìn)展1 疫苗備選毒株的選育 獲得疫苗備選株是疫苗研發(fā)的第一步。自2013年H7N9禽流感病毒感染人以來(lái)，已有很多研究機(jī)構(gòu)按照WHO的要求進(jìn)行H7N9禽流感病毒疫苗備選株的選育。世界多地雖已分離出多個(gè)H7N9禽流感毒株，但均與首次分離得到的A/Shanghai/2/2013 和 A/Anhui/1 / 2013株同源。因此，WHO推薦使用這兩個(gè)毒株作為母本株選育疫苗株。美國(guó)CDC的Callie Ridenour等采用反向遺傳重配技術(shù)重配A/Puerto Rico/8/34（H1N1）和 A /Shanghai/2/2013（H7N9）毒株，得到了IDCDCRG- 32A 和IDCDC-RG32A.3。日本國(guó)立傳染病研究所 （NationalInstituteofInfectiousDiseases， NIID）的 NAKAMURA等使用A/Puerto Rico/8/34（H1N1） 和A/Anhui/1/2013（H7N9）毒株，以6:2的形式進(jìn)行反向遺傳重配， 得到了3個(gè)不同的病毒NIIDRG-10、 NIIDRG-10.1和NIIDRG-10.2,通過(guò)對(duì)病毒抗原性、免疫原性、雞胚高產(chǎn)性等一系列分析比較后，獲得疫苗備選株NIIDRG-10.1。另外的一些疫苗備選株是由美國(guó)FDA或英國(guó)NIBSC重配得到的。

CHIA等使用 H7N9疫苗株NIBRG-268在MDCK細(xì)胞上進(jìn)行連續(xù)傳代，獲得可在MDCK細(xì)胞上高產(chǎn)的H7N9禽流感病毒疫苗株。WODAL等 使用Vero細(xì)胞對(duì)H7N9A/Anhui/1/2013virus進(jìn)行培養(yǎng)，用于制備人用H7N9禽流感疫苗全病毒滅活疫苗。

2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 目前已有H7N9全病毒滅活苗、 H7N9裂解疫 苗、 H7N9減毒活疫苗以及H7N9重組疫苗進(jìn)行了動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)。

2.1 H7N9****滅活疫苗動(dòng)物實(shí)驗(yàn) CHIA等及 WONG等的H7N9禽流感全病毒滅活疫苗的雪貂實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在無(wú)佐劑的情況下，單純H7N9全病毒滅活疫苗只能激起雪貂機(jī)體內(nèi)較低水平的體液免疫反應(yīng)，當(dāng)H7N9野毒株攻毒時(shí)，疫苗僅能保護(hù)雪貂免于死亡，不能使雪貂免于野毒株感染， 雪貂依舊會(huì)出現(xiàn)與對(duì)照組相似的臨床癥狀。與此結(jié)果相似的是， WODAL等使用H7N9禽流感全病毒滅活苗免疫小鼠及豚鼠后發(fā)現(xiàn)，疫苗能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體液免疫，產(chǎn)生抗HA和抗NA抗體，疫苗對(duì)免疫后小鼠和豚鼠的保護(hù)效果與接種劑量成正相關(guān)。此外，DUAN等用含佐劑的H7N9裂解疫苗 免疫小鼠，結(jié)果疫苗能對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)，激起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)體液免疫及細(xì)胞免疫，產(chǎn)生較平衡的Th1和Th2型免疫反應(yīng)。 總體來(lái)看，在H7N9禽流感滅活苗（全病毒滅活苗和裂解疫苗）中加入佐劑是提高其免疫效果的有效手段，開發(fā)能夠滿足H7N9疫苗使用的佐劑對(duì)于疫苗研發(fā)具有重要意義，目前對(duì)佐劑MF59、 AS03的研究較多，且已進(jìn)入臨床階段。

2.2 H7N9****減毒活疫苗動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 流感減毒活疫苗具有比滅活疫苗更好的免疫保護(hù)效果。減毒活疫苗能夠激起機(jī)體內(nèi)體液免疫及黏膜免疫，同時(shí)還能激起較好的細(xì)胞免疫。季節(jié)性流感減毒活疫苗生產(chǎn)時(shí)，使用具有冷適應(yīng)性的母本毒株與流行株進(jìn)行重配，獲得季節(jié)性流感減毒活疫苗備選株。由此啟發(fā)， DEJONGE等的研究小組將A/Leningrad/134/ 17/57（H2N2）與H7N9A/17/Anhui/2013/61重配制成減毒活疫苗，并進(jìn)行雪貂實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，接種 1至2劑減毒活疫苗后，雪貂能產(chǎn)生較好的體液免疫 和細(xì)胞免疫，能夠抑制野毒株在其體內(nèi)復(fù)制。YANG 等和KONG等的研究小組使用A/AnnArbor/ 6/60（H2N2）與A/Anhui/01/2013（H7N9）制得減毒活疫苗 ，雪貂實(shí)驗(yàn)結(jié)果與DEJONGE等的研究結(jié)果一致。 由此看出，人用H7N9禽流感減毒活疫苗在動(dòng)物模型上較滅活疫苗有效，不需佐劑即能有效激起 體液免疫、細(xì)胞免疫及黏膜免疫，保護(hù)免疫動(dòng)物不受感染， 具有進(jìn)一步進(jìn)行臨床研究的價(jià)值。

2.3 H7N9****重組疫苗動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 為了更快地生產(chǎn)出大量抗原制成疫苗，防控相關(guān)疾病，重組疫苗的研 發(fā)成為熱點(diǎn)。美國(guó)FDA在2013年批準(zhǔn)了三價(jià)季節(jié)性流感重組疫苗（FluBlock）上市。該疫苗被證明應(yīng)用于成年人是安全的，且免疫效果較傳統(tǒng)疫苗好。 因此，研究人員也開始研發(fā)人用H7N9禽流感疫苗 重組疫苗，主要為全長(zhǎng)HA重組疫苗（rHA）和 加 入了病毒M、NP等蛋白的VLPs疫苗。在H7N9rHA疫 苗研究初期發(fā)現(xiàn)， 與季節(jié)性流感重組疫苗相比，單純H7N9rHA疫苗對(duì)動(dòng)物模型的保護(hù)效果較差。 CAO等使用腺病毒表達(dá)載體制備出H7N9（A/ Anhui/1/2013） rHA疫苗， 加入核酸佐劑后，能有效激起小鼠體內(nèi)體液免疫和細(xì)胞免疫，對(duì) H7N9野毒株產(chǎn)生抵抗力，較好地保護(hù)BALB/c小鼠。類似的結(jié)果在YANG等的研究中得到了證實(shí)。LIU等純化出具有較高血凝抑制滴度的H7N9VLPs（含M、 NP蛋白），以其免疫雪貂，使用同源毒株A/Anhui/ 1/2013（H7N9）感染雪貂時(shí)發(fā)現(xiàn)，免疫組雪貂與對(duì)照組相比，基本未出現(xiàn)H7N9感染的臨床癥狀， 雪貂體內(nèi)的病毒復(fù)制得到了抑制，肺部和氣管也未受到病毒感染。SMITH等的研究結(jié)果還顯示， 加入佐劑的重組H7N9VLPs免疫動(dòng)物，還能對(duì)A（H7N3）產(chǎn) 生交叉保護(hù)。 重組疫苗在動(dòng)物模型上的研發(fā)成功，預(yù)示了重 組疫苗用于人體免疫的可行性。

**3.**人用H7N9禽流感疫苗臨床研究進(jìn)展 人用H7N9禽流感疫苗研發(fā)已成為目前研究的熱點(diǎn)。葛蘭素史克、諾華等疫苗公司以及美國(guó)過(guò)敏癥病研究所（NationalInstituteofAllergyand InfectiousDiseases， NIAID）等機(jī)構(gòu)已申請(qǐng)了人用H7N9 禽流感疫苗的臨床試驗(yàn)。諾華公司率先完成了H7N9VLPs疫苗一期臨床劑量研究，同時(shí)也完成了H7N9VLPs疫苗佐劑Matrix-M1TM的臨床一期、 二期研究。葛蘭素史克公司則完成了其疫苗在18-64歲人群中免疫原性及安全性臨床一期試驗(yàn)。

進(jìn)入一期臨床試驗(yàn)的受試者使用的H7N9禽流 感減毒活疫苗由俄羅斯RUDENKO等的研發(fā)小組研發(fā)， 在18-49歲人群中完成了臨床一期試驗(yàn)。 在一期臨床試驗(yàn)中，免疫組發(fā)生不良反應(yīng)的概率與安慰劑組無(wú)差異，疫苗中的減毒活毒不會(huì)從疫苗接種人群傳至未接種人群，證明疫苗具有較高的安全 性。該減毒活疫苗第1劑免疫后血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率可達(dá)48%，第 2 劑免疫后血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率可達(dá)93%。大部分受試者在接受兩劑免疫后，其體內(nèi)病毒特異的 CD4+細(xì)胞比例明顯增加， 預(yù)示受試者可能對(duì)H7N9野毒株具有抵抗力。

另一些進(jìn)入臨床研究的是針對(duì)疫苗中添加的 佐劑成分。AS03 和MF59佐劑均能提高H7N9滅活疫苗的免疫保護(hù)率，引起機(jī)體相應(yīng)的體液免疫和細(xì)胞免疫，但兩者進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)， AS03的效果優(yōu)于MF59， AS03能夠使 機(jī)體獲得更好的交叉免疫保護(hù)。新型免疫佐劑 Matrix-MTM 也被應(yīng)用于H7N9疫苗的研究中。前期 Matrix-MTM H5N1疫苗臨床試驗(yàn)證明，其能引起機(jī)體 產(chǎn)生同源或異源性抗體，同時(shí)能介導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生Th1 型細(xì)胞免疫反應(yīng)。Matrix-MTM 是H7N9疫苗開發(fā) 過(guò)程中較有研究前景的佐劑。

四、最新報(bào)道2017年2月15日晚間，天壇生物對(duì)外宣布其H7N9流感疫苗獲得臨床試驗(yàn)批件。此外，華蘭生物的H7N9流感疫苗已經(jīng)完成I期臨床試驗(yàn)，進(jìn)入II期臨床籌備階段；科興生物也已提交了H7N9疫苗的臨床試驗(yàn)申請(qǐng)。

五、展望截至目前，H7N9禽流感病毒感染人的病例仍以散發(fā)形式存在。H7N9禽流感病毒雖還不能人傳人，卻是一個(gè)潛在的大流行流感病毒人用H7N9禽流感疫苗的研發(fā)刻不容緩。目前已有H7N9禽流感 病毒滅活疫苗、 減毒活疫苗、重組疫苗完成了一期或二期臨床研究，但距離疫苗投產(chǎn)尚有一段距離。 新型重組疫苗在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出較好的免疫保護(hù)效果，但其生產(chǎn)過(guò)程中使用了腺病毒表達(dá)系統(tǒng)，長(zhǎng)期多次使用可能對(duì)接種者造成不可預(yù)估的影響。 現(xiàn)階段研發(fā)的人用H7N9禽流感經(jīng)典疫苗，除減毒活疫苗外，均需加入佐劑才能更好地激起機(jī)體的免疫反應(yīng)。因此，開發(fā)能夠滿足H7N9疫苗研發(fā)需要的佐劑至關(guān)重要。目前已用于臨床試驗(yàn)的佐劑有鋁佐劑、 ASO3、 MF59。新型佐劑Matrix-MTM正在申請(qǐng)臨床研究。Toll樣受體、核酸佐劑已應(yīng)用于其 他研究領(lǐng)域，可嘗試應(yīng)用于人用H7N9禽流感疫苗的研發(fā)。 此外，用于研發(fā)的人用H7N9禽流感疫苗株仍是雞胚依賴型?？紤]到雞胚培養(yǎng)流感病毒的局限性，基于細(xì)胞培養(yǎng)的，尤其是基于WHO推薦的能用于疫苗生產(chǎn)的Vero細(xì)胞培養(yǎng)，且能在Vero細(xì)胞上進(jìn)行連續(xù)傳代的H7N9禽流感病毒疫苗備選株的開發(fā)，在H7N9大流行流感疫苗的研發(fā)中具有重要意義。

參考文獻(xiàn)【1】 中國(guó)生物制品學(xué)雜志2017年2月第30卷第2期 Chin J Biologicals February2017，Vol.30 No.2《人用 H7N9 禽流感疫苗的研究進(jìn)展》 郭琦 綜述 /廖國(guó)陽(yáng) 審校

【2】 新京報(bào)(北京)《 多家藥企拿到H7N9疫苗臨床試驗(yàn)批件》 新京報(bào)訊(記者李丹丹)