[科普中國]-T-H糖蛋白

T-H糖蛋白的定義

Tamm-Horsfall蛋白（THP）是由腎小管髓袢升支及遠(yuǎn)端小管曲部的上皮細(xì)胞合成分泌的糖蛋白。正常情況下，尿液中含有少量的THP。

尿THP測定的臨床意義尿THP排出減少見于腎實(shí)質(zhì)病變?nèi)缏阅I衰竭及急性腎小球腎炎等導(dǎo)致腎單位大量減少，GFR顯著降低時(shí)，而單純下尿路炎癥時(shí)尿THP水平無變化。尿液THP含量增加見于各種原因如間質(zhì)性腎炎、尿路長期梗阻、自身免疫性藥物中毒、銅和鉻中毒等疾病引起的腎臟損傷，并與病情相一致。尿道結(jié)石患者體外震波碎石治療效果判斷：碎石成功則尿THP含量逐漸升高，至第二天達(dá)峰值，之后逐漸下降；若碎石失敗則尿THP含量無變化。

尿Tamm-Horsfall蛋白升高和/或Tamm-Horsfall蛋白抗體陽性，提示腎盂腎炎。

尿液中含量最多的蛋白之一一一T-H蛋白（Tamm-Horsfall protein），可能是一種抑制尿路結(jié)石形成的大分子有機(jī)物。在草酸鈣結(jié)晶體外試驗(yàn)的有機(jī)質(zhì)中，及大鼠腎結(jié)石模型草酸鈣結(jié)晶中均發(fā)現(xiàn)有THP的存在，同時(shí)在乙二醇誘導(dǎo)的草酸鈣尿路結(jié)石大鼠模型的腎組織及尿液中THP表達(dá)量均減少1。但是抑制腎結(jié)石形成的機(jī)制及其所起的作用，不同的研究得到不同的結(jié)果，存在較大爭議。這些爭議如結(jié)石患者與正常人群尿中THP含量的差別、THP抑制結(jié)石形成的影響因素、THP在結(jié)石形成中所起的作用及與其它結(jié)石抑制因子之間的相互關(guān)系等等，都有待于進(jìn)一步研究。雖然國外有研究者報(bào)道了腎結(jié)石大鼠腎臟組織THP表達(dá)的結(jié)果,但還沒有治療因素干預(yù)下腎結(jié)石大鼠腎臟組織表達(dá)的研究報(bào)道。

構(gòu)椽酸是研究最早最充分的結(jié)石抑制因子之一，但其確切的防石機(jī)制，與其他大分子抑制因子之間的關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。因此，我們研究構(gòu)椽酸鉀干預(yù)下腎結(jié)石大鼠腎組織內(nèi)THP的表達(dá)，了解構(gòu)椽酸鉀干預(yù)對THP表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討構(gòu)椽酸鉀抑制結(jié)石形成的機(jī)制，及構(gòu)椽酸鉀與THP之間的相互關(guān)系，這不僅為解析腎結(jié)石發(fā)病機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對臨床尋求腎結(jié)石的防治途徑也具有一定的指導(dǎo)意義。

提取尿T-H糖蛋白的主要步驟取正常人尿液20升，加入等量蒸餾水稀釋。放固體氯化鈉于尿液內(nèi)，使其濃度達(dá)。0.58mol/L，充分混勻后于4℃靜置48小時(shí)，此時(shí)，可見白色絮狀沉淀物形成。棄去上清液，將沉淀物低溫(4℃)離心(3000r/min，30分鐘)將離心后的沉淀物用0.58mol/L的氯化鈉溶液反復(fù)洗3次，然后，溶于一定量的蒸餾水中，對水，置4℃透析3~5天，每日換水4-5次，以徹底清除殘留的氯化鈉，最終獲得無色透明的粒性液體，即為THP。分裝，凍干，低溫保存?zhèn)溆谩⑻崛〉腡HP，按照蛋白質(zhì)鑒定方法，進(jìn)行生物學(xué)和免疫學(xué)純度的鑒定。主要包括分子量測定，氨基酸組成分析，抗原與相應(yīng)抗體的特異性免疫電泳等。經(jīng)上述檢驗(yàn)證實(shí)，所提取的THP完全符合要求。

抗T-H糖蛋白杭體的制備將人尿THP作為抗原，免疫新西蘭白兔制備抗人THP抗體。方法:每只兔每次用抗原量lmg，與等量完全Ferund佐劑混合，皮下、肌肉多點(diǎn)注射，每2周加強(qiáng)免疫1次，共3次。所得抗血清先經(jīng)鹽沉淀法粗提，后經(jīng)離子交換層析法純化。一純化的抗血清，經(jīng)雙向免疫擴(kuò)散法鑒定，結(jié)果顯示與相應(yīng)抗原呈高度特異性結(jié)合呈現(xiàn)一條沉淀線2。