[科普中國]-生物活素

簡介

在不含有這種微量物質(zhì)的合成培養(yǎng)基中，酵母不能增殖。其有效成分，已確定的有肌醇（生物活素Ⅰ）、β-丙氨酸、泛酸（生物活素Ⅱa）及由F.Kgl分離的生物活素（生物活素Ⅱb，維生素H，輔酶R）等。

研制(1)將粗制的海藻酸聚多糖、海洋甲殼胺活素按比例用生物技術(shù)進(jìn)行45℃加溫、溶解、提純。

(2)將海洋生物復(fù)合酶用提純的具有活性的生物液進(jìn)行吸附包被。按比例溶解于純凈水中加熱54℃ ,再進(jìn)行磁力攪拌、乳化反應(yīng),再按比例純化水中進(jìn)行冷卻。

菌片的制備 試驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(ATCC 10231)。用磷酸鹽緩沖液(PBS)將其24 h新鮮培養(yǎng)物洗下,制成菌懸液,染于脫脂的無菌布片(1 cm× 1 cm)上,干燥,制成含菌量為5× 105～ 106 cfu/片的菌片。

中和劑鑒定試驗(yàn) 試驗(yàn)指示菌為金黃色葡萄球菌、白色念珠菌。試驗(yàn)設(shè)平行8組。結(jié)果判定,以第1組不長菌或有少量菌生長且少于第2組,第2組菌數(shù)> 50 cfu/ml;第3、4、5組間菌數(shù)相差不超過15%且在規(guī)定范圍;第6、7、8組不長菌;試驗(yàn)重復(fù)3次結(jié)果一致,表明所選中和劑及濃度適宜。

載體浸泡定量殺菌試驗(yàn) 按每片5.0 ml的量,吸取相應(yīng)濃度的生物活素注入無菌平皿中。置(20± 1)℃水浴箱內(nèi)5 min后,分別放入預(yù)先制備的菌片3片。作用至預(yù)定時間,取出菌片,分別移入到盛有5.0 ml中和劑溶液的試管中振敲混勻試管80次,取1.0 ml接種無菌平皿,傾注普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(白色念珠菌用沙堡葡萄糖瓊脂),于37℃溫箱培養(yǎng)48 h計(jì)數(shù)平板菌落數(shù),試驗(yàn)重復(fù)3次(包括對照);計(jì)算平均殺滅率。判定結(jié)果以平均殺滅率大于99.90%為消毒合格。

穩(wěn)定性試驗(yàn) 將裝有1 000 ml該消毒劑的原裝玻璃瓶兩支(瓶口蓋以膠塞后外加塑料膜密封)置54 ℃溫箱14d、37℃溫箱90 d。于放置前、后,分別取樣檢測對金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的殺滅效果。作用時間分組及其他試驗(yàn)條件均與原載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)相同。儲存后樣品增加10%的濃度,對微生物的殺滅效果仍能達(dá)到消毒的要求,可判為通過。

金屬腐蝕性試驗(yàn) 金屬片為圓形直徑24.0 mm,厚1.0 mm,穿一直徑為2.0 mm小孔,表面積總值約為9.80cm2,光潔度為6。銅、鋁片、碳鋼、不銹鋼,用清潔洗滌劑浸泡,去油,洗凈;以120號粒度水砂紙磨去金屬表面的氧化層,再用自來水沖凈。測量片的直徑、厚度、孔徑(精確至0.1 mm)。用無水丙酮再次脫脂。置50 ℃恒溫箱中干燥1 h后將處理后的金屬片放天平內(nèi)稱重,為試驗(yàn)前重量。分別(每種3片)掛在4個燒杯600 ml最高使用濃度消毒液中浸泡72 h,浸泡規(guī)定時間后取出金屬片除去腐蝕產(chǎn)物并清洗后,用粗濾紙吸干水分,干燥1 h后分別在天平上稱重。作為試驗(yàn)后重量。同時做對照。計(jì)算腐蝕速率和腐蝕度。

影響因素試驗(yàn) 有機(jī)物對殺菌效果的影響試驗(yàn):干擾物為小牛血清,設(shè)置對照組;含25%小牛血清組;含50%小牛血清組等3組。各組所用海洋生物活素消毒液濃度和作用時間,同殺菌試驗(yàn)。

毒性試驗(yàn)

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 選體重為20～ 22 g的昆明種一級小鼠20只,雌、雄各半,一次經(jīng)口灌胃試驗(yàn)劑量藥液后觀察14 d,記錄小鼠各種癥狀和死亡情況。

蓄積毒性試驗(yàn) 取體重為180～ 200 g的昆明種一級大鼠20只,雌、雄各半。按體重計(jì)算染毒劑量,第1～ 4 d染毒劑量為0.1 LD50,以后每4 h遞增1.5倍劑量,直至28 d。每4 h稱重1次。

急性眼刺激試驗(yàn) 用健康白色家兔4只,體重2.5～ 3.0 kg,將該劑原液0.1 ml滴入家兔左眼結(jié)膜囊內(nèi),被動閉合4 s后用生理鹽水沖洗,右眼為對照。于滴眼后6、24、48、72 h和4、7 d觀察并記錄眼局部刺激反應(yīng)。

急性皮膚刺激試驗(yàn) 取4只健康白色家兔,體重2.5～ 3.0 kg,將背部脊柱兩側(cè)毛分別3.0 cm× 3.0 cm,不損傷表皮。將0.2 ml該劑原液均勻涂抹在左側(cè)皮膚上,用二層紗布和玻璃紙覆蓋后固定。右側(cè)皮膚作為空白對照。于除去受試物后1、24、48 h分別觀察皮膚反應(yīng)。

小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 選用50只健康小鼠,隨機(jī)分為5組,每組雌、雄各5只,共設(shè)3個劑量組,劑量設(shè)計(jì)分別為1/2LD50、1/5LD50、1/20LD50mg/kg體重,另設(shè)陰性對照及陽性對照,陽性組給予環(huán)磷酰胺40 mg/kgBW。受試物及陽性物均經(jīng)口灌胃,采用30 h給藥法,即兩次給藥間隔24 h,于末次給藥后6 h,常規(guī)取股骨骨髓制片、固定、染色,于油鏡下對每只動物觀察1 000個嗜多染紅細(xì)胞,計(jì)算微核率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

小鼠精子畸形試驗(yàn) 選用25只雄性健康小鼠,隨機(jī)分為5組,每組各5只,共設(shè)3個劑量組,劑量設(shè)計(jì)分別為1/2、1/5、1/20LD50,另設(shè)陰性對照及陽性對照,陽性組給予環(huán)磷酰胺40 mg/kgBW。陰性對照為蒸餾水。受試物、陰性對照物及陽性物均經(jīng)口灌胃,連續(xù)5 d,于首次給藥后的第35 d處死動物,取副睪制片、固定、染色,于油鏡下對每只動物計(jì)數(shù)2 000條精子,計(jì)算精子畸形發(fā)生率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

殺菌效果中和劑試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)表明,用金黃色葡萄球菌、白色念珠菌試驗(yàn),慈華牌海洋生物活素300 mg/ L稀釋液用含40 g/ L吐溫- 80+ 20 g/ L卵磷脂+ 10 g/ L甘氨酸※PBS緩沖液,可有效中和試驗(yàn)濃度的海洋生物活素消毒液殘余作用,結(jié)果符合規(guī)定要求。

殺菌結(jié)果

結(jié)果表明,在19～ 21 ℃條件下,以含體積分?jǐn)?shù)300 mg/ L海洋生物活素溶液作用2 min,對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌平均殺滅率為99.99%;作用5 min,對白色念珠菌作用殺滅率均達(dá)99.99%,見表1。

穩(wěn)定性

試驗(yàn)表明,慈華牌海洋生物活素在54 ℃下放置14 d, 37℃、相對濕度80%放置90 d有效成分下降率為6.12%,殺菌效果無明顯影響,見表2。

金屬腐蝕性

經(jīng)72 h生物活素金屬腐蝕性試驗(yàn)結(jié)果,對不銹鋼、銅無腐蝕性,對碳、鋼、鋁基本無腐蝕性。

影響因素試驗(yàn)

有機(jī)物對殺菌效果的影響試驗(yàn):染布片菌懸液中含體積分?jǐn)?shù)50%小牛血清對該劑殺菌效果無明顯影響。

毒性

在急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)中,小鼠染毒后未見異常反應(yīng)外。未出現(xiàn)死亡,表明該劑原液對雌、雄小鼠急性經(jīng)口LD50> 5 000 mg/kg。按化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)屬實(shí)際無毒性。蓄積毒性試驗(yàn)給藥20 d,雌、雄小鼠均無死亡情況發(fā)生,小鼠蓄積系數(shù)K> 5,按蓄積毒性分級標(biāo)準(zhǔn)為弱蓄積毒性。家兔皮膚刺激試驗(yàn),該劑原液對皮膚刺激反應(yīng)積分均值為0。按“皮膚刺激強(qiáng)度分級”標(biāo)準(zhǔn)屬無刺激性。家兔急性眼刺激試驗(yàn),該劑原液滴眼4 s后沖洗,對動物急性眼刺激積分指數(shù)為3,按“眼刺激強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)”對眼無刺激性。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)為應(yīng)陰性,無致突變性。精子畸形試驗(yàn)結(jié)果為陰性。1