[科普中國]-植板率

定義

利用平板法培養(yǎng)單細胞或原生質體時，常以植板率來表示能分裂長出細胞團的細胞占接種細胞總數(shù)的百分數(shù)。其中每個平板上接種的細胞總數(shù)，等于鋪于平板時加入細胞懸浮液的容積和每單位容積懸浮液中細胞數(shù)的乘積。1

測定方法方法1接種培養(yǎng)(植板)后2周直接從輕輕混勻的培養(yǎng)懸浮物中吸取懸液(取樣)滴在載玻片上，在8～10倍解剖鏡下鏡檢觀察，分別記錄每1視野中的原生質體數(shù)及可見的克隆數(shù)；每1樣品取樣3～5滴，觀察總視野約10～20個，統(tǒng)計所鏡檢觀察到的總克隆數(shù)及總原生質體數(shù)2。依下式得植板率：

植板率=總克隆數(shù)/(總克隆數(shù)+總原生質體數(shù))或%植板率=100×[總克隆數(shù)/(總克隆數(shù)+總原生質體數(shù))]

取樣時間依不同材料及不同試驗條件可有不同，也有在培養(yǎng)過程測2次植板率的(如在2周及4周時測)，但均需在鏡檢時克隆的直徑等于或小于0.1mm為宜。

方法2除直接取樣測定外，也可在培養(yǎng)起始取已知密度、一定體積的原生質體懸液(50～200ul懸液，內含原生質體數(shù)約10)，在培養(yǎng)一定時間(如2周)后(培養(yǎng)時要適時加液以保持不干)，鏡檢觀察并記錄所取樣品內所有的克隆數(shù)，重復測定3次，2最后依下式得出植板率：

植板率=克隆數(shù)仞始植板的原生質體數(shù)或%植板率=100×(克隆數(shù)砌始植板的原生質體數(shù))

式中初始植板的原生質體數(shù)可根據(jù)取樣的體積與樣品密度算出，此基數(shù)多采用成活原生質體數(shù)。此方法多應用于懸滴培養(yǎng)及飼喂培養(yǎng)中。

注意事項如果在瓊脂培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基中，植板細胞的初始密度是1×104或1×105個細胞/ml，植板后由相鄰細胞形成的細胞群落常常混在一起。由于這種現(xiàn)象出現(xiàn)得很早，不可能在此之前進行分植或稀釋，因而給分離純單細胞無性系的工作帶來很大困難。若能把植板細胞密度減小，或能在完全孤立的情況下培養(yǎng)單個細胞，這個問題則可減輕。但是，就像在懸浮培養(yǎng)中一樣，在正常條件下，每個物種都有一個最適的植板密度，同時也有一個臨界密度。當?shù)陀谶@個臨界密度時，細胞就不能分裂。因此，為了在低密度下進行細胞培養(yǎng)，或是培養(yǎng)完全孤立的單個細胞，必須采用一些特殊的方法。3