[科普中國]-生物樣品

植物樣品的采集植物樣品采集的一般原則

1、代表性

選擇一定數(shù)量的能符合大多數(shù)情況的植株為樣品。采集作物或蔬菜時，不要選擇田埂邊上及離田埂2m范圍以內(nèi)的樣品；如采集水生植物，則應(yīng)注意離開污水排放口適當(dāng)距離。

2、典型性和適時性

采樣的部位要能充分反映所了解的情況，這就是典型性。而適時性是根據(jù)研究的目的和環(huán)境污染物對植物的影響，必須按照植株的生長狀況，發(fā)育階段以及植株的不同部位，如根、莖、葉和果實(shí)或具體要求進(jìn)行分別采樣。為了植株同一部分進(jìn)行比較分析，不能將植株的上、下部位隨意混合。

植物樣品的采集方法1、采樣前的準(zhǔn)備工作

采樣前應(yīng)預(yù)先準(zhǔn)備好采集工具，如小鏟、枝剪、剪刀、布和塑料袋等，還有標(biāo)簽、記錄本、樣品采集登記表等物品。

2、樣品采集量

樣品采集量主要是考慮樣品部位處理后的代表性及是否夠測定用。為了保證足夠的數(shù)量，一般要求至少有20~50g干樣品，最好有1kg干樣。如果是新鮮的樣品，以含80%~90%的水分來計(jì)算，要比干樣量多5~10倍，最好5~10kg?？傊畱?yīng)以不少于0.5kg新鮮樣品為原則。對水生植物、水果、蔬菜等含水量高的植物，采樣量還需酌情增加。

3、樣品的采集在已選好的樣區(qū)做成樣方，草木及農(nóng)作物樣區(qū)為1m×1m，灌木植物2m×2m，禾木群落10m×10m。在樣方區(qū)內(nèi)選擇優(yōu)勢種的植物分別采集根、莖、葉。對于農(nóng)作物、蔬菜及草本植物，在各樣區(qū)內(nèi)采5～10個樣品。對于灌木和喬木群落應(yīng)該按草木、灌木、喬木分層采樣并編號。在采集測定樣品的同時，對優(yōu)勢種還應(yīng)采集標(biāo)本以作簽定植物科、屬之用。

一般在各采樣小區(qū)內(nèi)采集一個代表樣品，此代表樣品是在這塊地中分散于5~10處，采取5~10個樣品混合組成的。采樣點(diǎn)的布置方法以梅花形五點(diǎn)取樣，或在小區(qū)內(nèi)平行前進(jìn)以交互間隔方式取樣，如右圖所示。1

4、樣品的保存

將采集好的樣品裝入布口袋，并附上編寫好樣品號的標(biāo)簽。采集時必須做好野外調(diào)查記錄和樣品采集登記表。對一些特殊情況也應(yīng)進(jìn)行記錄，以便查對和分析數(shù)據(jù)時參考。采集好的樣品應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)輸時要注意通風(fēng)干燥，以防樣品發(fā)霉腐爛，最好為冷藏運(yùn)輸。用四分法或八分法選取樣品。用新鮮樣品進(jìn)行檢測時，應(yīng)立即送往實(shí)驗(yàn)室，充分洗滌、搗碎處理和檢測。如當(dāng)天難以處理，鮮檢樣品應(yīng)該暫時冷藏在冰箱內(nèi)。其余樣品可在通風(fēng)干燥處晾干，去掉灰塵、雜物、脫殼、磨碎，通過1mm篩孔，儲存在磨口廣口玻璃瓶中備用。

動物樣品的采集動物的各部分組織均可以分別作為采集對象，但通常是用尿、血液、毛發(fā)和指甲等。

1、動物的血液

動物一般多用耳緣靜脈取血，先去毛，要去凈毛，不傷皮膚，用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦動物耳朵，例如兔耳朵，用燈泡照射加熱使其血管充血，用大頭針刺破靜脈放血 (先從遠(yuǎn)心端刺)，將血液放人抗凝杯中，邊收集邊搖勻，以防凝固。

2、動物的尿液

為收集動物的尿液，可將動物放在代謝籠中，使動物的尿液可經(jīng)下漏斗流人采樣瓶中。一般晨尿濃度較高，可一次收集，也可收集2h甚至24h的尿液。

3、 頭發(fā)和指甲

頭發(fā)作為樣品的主要優(yōu)點(diǎn)是:采樣時受檢者無痛、無創(chuàng)傷。樣品容易貯存和運(yùn)送，不需特殊容器;樣品不易變質(zhì)，可長期保存等。

生物樣品的預(yù)處理在生物樣品的測定中，根據(jù)測定項(xiàng)目的不同，首先要經(jīng)過消解 （或灰化），或提取和分離等處理工作，然后才能進(jìn)行待檢組分含量的測定。處理生物樣品的方法有消解法 （又稱濕法氧化或消化法，主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-過氧化氫消解法）、灰化法 （又稱燃燒法或高溫分解法）、提取法（包括振蕩提取、組織搗碎、索氏提取器提取）、分離法和濃縮法。2

生物待檢樣品的制備植物待檢樣品的制備1、新鮮樣品的制備

測定植物樣品中易轉(zhuǎn)化或易降解的即易起變化的物質(zhì) （如酚、氰、有機(jī)農(nóng)藥等）及多汁的瓜果、蔬菜樣品，應(yīng)在新鮮狀態(tài)下進(jìn)行測定。制備這些樣品時，先將各平均樣品用清水、去離子水 （或重蒸餾水）洗凈 （受大氣污染的樣品還應(yīng)先用洗滌劑洗），并用干凈紗布輕輕擦洗。然后切碎、混合均勻。如蔬菜樣品可稱取100g放入電動搗碎機(jī)的搗碎杯中，加同樣質(zhì)量的蒸餾水或去離子水，含水分多的樣品也可以不加水 （如熟透的西紅柿），含水少的樣品可加兩倍于樣品的水。待檢樣品按實(shí)際質(zhì)量稱量。打碎制成均勻漿狀。含纖維較多或較硬的樣品，如禾本科植物莖稈、葉子等，不能用搗碎機(jī)搗碎，可用不銹鋼刀或剪刀切成小碎塊或碎片，混合均勻備測定用。

2、烘干樣品的制備

用干樣進(jìn)行檢測的樣品通常要經(jīng)過如下處理：

（1）清除污物

任何灰塵、泥土、肥料、農(nóng)藥等沾污物均會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，所以必須在烘樣前擦刷或用清水、0.1%～0.3%的去污物劑和去離子水等清除樣品上的污物，清洗的操作必須迅速，以免溶液和樣品長時間接觸而引起某些成分如鉀、鈣的損失。

（2）樣品的烘干

經(jīng)擦凈或洗凈的樣品，如果不用鮮樣進(jìn)行測定，最好盡快在鼓風(fēng)干燥箱 （或在低溫真空干燥箱中）烘干，以防發(fā)霉變質(zhì)，并減少化學(xué)和生物的變化。烘干時要注意適宜的溫度，溫度過高時，會引起易揮發(fā)元素的損失。

（3）樣品的研磨

為使樣品的組成更為均勻和易于處理，須將烘干的樣品進(jìn)行研磨粉碎并混合均勻，谷類的果實(shí)樣品須先脫殼再進(jìn)行粉碎。

用于測定金屬元素的樣品，研磨時應(yīng)注意金屬器械對樣品的污染問題，如測定樣品中的鉻等含量時，不能用鋼制粉碎機(jī)，而用玻璃研缽碾碎，過篩最好用尼龍篩，否則會有錳、鎳等元素的污染?？傊?，在測定樣品中的微量元素時，最好是使用瑪瑙研缽研碎，以免因再次受到污染引起誤差。粉碎磨好的樣品儲存于聚乙烯瓶或磨口廣口玻璃瓶中備用。

動物待檢樣品的制備1、血、尿待檢樣品的制備

（1）全血的制備

環(huán)境生物測定中所用的全血是抗凝的全血，即在取出人 （或動物）的血液后，必須立即與適量的抗凝劑充分混合，以免血液凝固。為了使血液注入容器后均勻的與抗凝劑接觸，必須使抗凝劑能在容器底部鋪成薄層，這可在烘干時轉(zhuǎn)動容器來實(shí)現(xiàn)。取血量為數(shù)毫升時一般用試管儲血。用上述方法準(zhǔn)備的加有抗凝劑的試管稱為抗凝試管。

（2）血漿的制備

環(huán)境生物污染測定中所用的血漿也是抗凝血漿。制備方法是將抗凝血在離心機(jī)中離心，使血細(xì)胞下沉，這樣所得的上清液即為血漿。在血漿制備過程中應(yīng)防止溶血，故要求采取血液時所用的注射器、針頭等都需清潔干燥，取得全血后也要避免劇烈震動。

（3）血清的制備

血清是指血液凝固后自行析出的液體。制備血清的方法是采取血液，不加抗凝劑，在室溫下使其凝固，通常經(jīng)3h后血塊收縮析出血清，離心分離，吸取上清液即為血清。制備血清也要防止溶血，故所用設(shè)備必須干燥，且在血塊收縮后及早分出血清。

（4）無蛋白質(zhì)血液的制備

在環(huán)境生物污染測定中有時須避免蛋白質(zhì)的干擾 （常與試劑發(fā)生渾濁或沉淀），常用沉淀蛋白質(zhì)的試劑除去血液中的蛋白質(zhì)，而保留應(yīng)測定的化學(xué)成分，這種操作稱為無蛋白血液的制備。無蛋白血濾液的制備應(yīng)根據(jù)具體檢測要求來選擇沉淀蛋白質(zhì)的試劑。

2、動物組織和器官待檢樣品的制備

離體不久的組織在適宜的溫度和pH值條件下，可以進(jìn)行一定程度的物質(zhì)代謝。所以在生物測定中，常利用離體組織制成不同的組織樣品，用來研究生物化學(xué)變化。常用的組織制品有：組織糜、組織勻漿、組織提取液。

（1）組織糜：將新鮮組織用剪刀迅速剪碎，再與砂及適當(dāng)?shù)木彌_液磨碎或用絞肉機(jī)絞成糜狀。

（2） 組織勻漿：新鮮組織稱量后剪碎，加入適當(dāng)?shù)膭驖{制備液，用高速組織搗碎機(jī)攪碎組織而制成勻漿。如果組織量較少，可在剪碎組織后用組織勻漿器磨成勻漿。

（3）組織提取液 將組織勻漿經(jīng)過細(xì)紗布過濾的液體或經(jīng)離心去沉淀后的上清液，即為組織提取液。3