[科普中國]-miRNA檢測

miRNA檢測是一種檢測生物體內(nèi)miRNA表達(dá)情況的技術(shù)，包括Northern雜交、微陣點分析、實時定量PCR等。檢測miRNA的表達(dá)豐度，對疾病的診斷和治療具有一定的意義。

常見檢測方法1．Northern雜交
該方法通過將RNA變性及電泳分離后，將其轉(zhuǎn)移到固相支持物上，從而用于雜交反應(yīng)，Northern雜交不僅能夠靈敏檢測出RNA的豐度，還能結(jié)合RNA marker來檢測RNA的分子大小，這對于排除其他小分子RNA的污染有重要意義。Northern雜交也可用作miRNA的定量分析，只需將已知濃度梯度的寡核苷酸對照物與待測樣品進(jìn)行平行雜交即可。該方法的缺點是耗時、耗量，一次檢測需要3個工作日，需要5到10微克的總RNA量才能成功檢測出miRNA。
2．微陣點分析
采用高密度的熒光標(biāo)記探針與RNA樣本雜交，通過熒光掃描獲得表達(dá)圖譜，借助相應(yīng)軟件進(jìn)行miRNA的表達(dá)分析。由于在設(shè)計探針時可以包含所有可用miRNA序列，因此微點陣可以作高通量的miRNA分析。不足之處在于需要足夠的RNA初始樣本，大約為每個微點陣5微克。
3．實時定量PCR
該方法主要是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析。既可檢測miRNA前體，又可檢測成熟miRNA的表達(dá)。與雜交方法相比，實時定量PCR可以高度靈敏地檢測出低豐度表達(dá)的靶分子，也常用于miRNA表達(dá)譜結(jié)果的鑒定。目前已有新的實時定量PCR的方法，利用莖環(huán)狀引物進(jìn)行miRNA的反轉(zhuǎn)錄，然后再進(jìn)行實時定量PCR。
以上三種檢測方法中，Northern雜交法是驗證和確認(rèn)miRNA的重要方法，但比較繁瑣且靈敏度低，不適于臨床樣本的高通量檢測；實時定量PCR法是最方便使用且有效的檢測方法。

臨床應(yīng)用由于miRNA具有高度特異性、高度保守性，可以提高疾病診斷的準(zhǔn)確性和精確度。另外，根據(jù)miRNA時序性的變化特點，可以針對患者血漿、血清、尿、唾液中的miRNA表達(dá)的變化確定患者疾病的進(jìn)展情況，并制定相應(yīng)的個體化治療方案。此外，miRNA檢測對新型生物醫(yī)藥制劑的研發(fā)也具有重要意義。